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3차원 배양용 콜라겐 Cellmatrix를 이용한 배양법 소개

■ 서론

일본의 Nitta gelatin社의 Cellmatrix는 조직배양용 콜라겐으로 개발되어 콜라겐을 이용한 다양한 배양이 가능하게 되었습니다. 여러 종의 콜라겐 제품을 취급하고 있으며, 실험용도에 맞게 최적의 제품을 선택할 수 있습니다. 그 중에서 가장 많이 사용되고 있는 Cellmatrix Type I-A를 위주로 설명 드리겠습니다.

Cellmatrix Type I-A 제품 사진

■ 제품 특징

  • 겔의 강도가 높기 때문에 콜라겐겔 포매 배양에 적합합니다.
  • 겔의 투명도가 높아서 현미경 관찰이 용이합니다.
  • 돼지 힘줄에서 유래한 산가용성의 콜라겐입니다.
  • 농도는 3.0mg/ml, pH3의 무균용액입니다.

■ 용도

  • 콜라겐겔 포매 배양
  • 콜라겐겔 상 배양
  • 부유 콜라겐겔 배양
  • 샌드위치 배양

■ 보관 및 사용기간

  • 저온저장 (4~8℃) 냉장보관.
  • 동결시키면 사용할 수 없습니다.
  • 유효기간: 제조일로부터 1년.

■ Gel 투명도 비교

Cellmatrix Type I-A는 3차원배양을 위한 겔이 되는 속도 및 투명도를 최적화한 제품입니다.
세포가 배양용기 바닥면까지 침투하기 전에 빠르게 겔을 형성할 수 있습니다.
또한 겔의 투명도가 매우 높으며 세포의 관찰을 용이하게 할 수 있습니다.

■ 콜라겐겔 배양방법

이하의 A, B, C용액을 준비합니다.

A: Cellmatrix Type I-A 또는 I-P
B: 10배 농도의 농축배양액
C : Reconstitution buffer

냉각을 하면서 A (8), B (1)을 기포가 생기지 않도록 잘 섞어 줍니다.
그 다음 C (1)을 첨가하여 혼합합니다.
*5배 농도의 농축배양액을 사용할 경우는 A:B:C=7:2:1이 됩니다.

▶콜라겐겔 상의 배양
세포를 콜라겐겔에서 배양하는 방법입니다. 콜라겐겔 상에서 배양함으로써, 생체내에 근접한 환경에서 세포를 배양할 수 있습니다.

냉각한 상기의 콜라겐 혼합용액을 배양접시에 분주하고 37℃에서 20분간 가온하면 겔이 됩니다.

세포분산액을 겔상에 뿌립니다.
세포가 겔에 접착한 후에는 평상시의 단층배양과 동일량으로 배양이 진행됩니다.

▶콜라겐겔 포매 배양
세포를 콜라겐겔의 안에서 삼차원적 배양을 하는 방법입니다.

냉각한 상기의 콜라겐 혼합용액을 원심회수한 세포의 pellet을 첨가하여 혼합합니다.

본 세포를 포함한 콜라겐 혼합용액을 배양접시에 분주하고, 37℃에서 30분간 가온하여 겔화합니다.

겔이 형성된 후 배양액을 겹치게 하여 이후는 평소의 배양과 같은 모양으로 진행합니다.

■ 콜라겐겔 코팅방법
콜라겐 분자를 코팅한 접시에 세포를 배양하는 방법입니다. 세포접착성의 향상 및 콜라겐 분자와의 접촉에 의한 세포내 시그널의 활성화가 기대됩니다.

■ Cellatrix 각 제품의 특징
Cellmatrix 각 제품은 겔의 기능 및 점성이 다릅니다. 콜라겐겔을 사용하여 배양하는 경우에는 겔 기능이 뛰어난 제품을 사용하십시오. 또한 점성이 낮은 제품과 같이 취급이 용이하므로 코팅 배양에 적합합니다. 아래에 각 제품의 특징을 정리하고 있으므로 참조하십시오.
Cellmatrix Type Ⅲ 및 TypeⅣ 는 단독으로는 겔을 형성하지 않습니다. 이 제품을 이용하여 겔 배양을 할 경우에는 Cellmatrix Type Ⅰ-A와 혼합하여 겔화시킬 수 있습니다. Cellmatrix Type Ⅰ-A의 함량이 40 % 이상이면 안정적인 겔을 형성할 수 있습니다.

■ 콜라겐겔 포매 배양한 마우스 유방암 세포의 증식형태

Cellmatrix 제품 겔화 능력 코팅성
Cellmatrix Type I-A
Cellmatrix Type I-P
Cellmatrix Type I-C
Cellmatrix Type III ×
Cellmatrix Type IV ×